临诊诊断
白尾鹿出现上述特征性症状,处于库蠓活动季节,死后剖检见各组织和脏器中都有明显出血,浆膜囊内有液体贮积,腹膜水肿,可作出初步诊断。
病毒分离
在发热期,取病毒血液或脾脏组织作成10%的乳剂,接种健康白尾鹿,可使其在5-6天内发生典型的流行性出血病和死亡。也可将上述乳剂作离心沉淀处理,并根据需要加入适量抗菌素后接种组织培养的鹿胎肾细胞、BHK21、Vero、Hela细胞,进行病毒分离。
血清学检查
目前,用于检查鹿流行性出血病的血清学方法有琼脂免疫扩散试验、补体结合试验、荧光抗体技术、血清中和试验。最常用的是琼脂免疫扩散试验和血清中和试验。
(1)琼脂免疫扩散试验:用生理盐水配成1%琼脂板待凝固后,打孔。中央孔加入EHD抗原,周围1,3,5孔加入阳性血清,2,4,6孔加入被检血清。置湿盒内在室温下作24-48h,判定结果。
(2)血清中和试验:取已灭活处理的血清,在96孔细胞培养板上,用稀释液作一系列倍比稀释,使其稀释度分别为原血清的1:2,1:4,1:8,1:16,……,每孔含量为50微升,每个稀释度作4孔。每孔加入经测定毒价的EHD病毒液50微升。置于37℃温箱中1h。每孔加入100微升细胞悬液。37℃温箱培养,自培养48h开始观察,144h终判。为保证试验结果的准确性,试验时必须设立阳性和阴性血清对照,血清毒性对照,病毒对照和正常细胞对照。
一般先用琼脂免疫扩散试验进行筛选,然后用血清中和试验定型。