方法名称: 门冬酰胺酶—蛋白质含量的测定—氮测定法
应用范围: 本方法采用滴定法测定门冬酰胺酶中蛋白质含量。
本方法适用于门冬酰胺酶。
方法原理: 供试品照氮测定法测定,用硫酸滴定液滴定,根据滴定液使用量,计算蛋白质的含量。
试剂: 1. 硫酸钾
2. 硫酸铜
3. 硫酸
4. 40%氢氧化钠溶液
5. 锌粒
6. 2%硼酸溶液
7. 硫酸滴定液(0.05mol/L)
8. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液
9. 基准无水碳酸钠
仪器设备:
试样制备: 1. 40%氢氧化钠溶液
取氢氧化钠40g,加水100mL使溶解。
2. 2%硼酸溶液
取硼酸2g,加水100mL使溶解。
3. 硫酸滴定液(0.05mol/L)
配制:取硫酸3mL,缓缓注入适量水中,冷却至室温,加水稀释至1000mL,摇匀。
标定:取在270~300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.15g,精密称定,加水50mL使溶解,加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴,用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时,煮沸2分钟,冷却至室温,继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。每1mL硫酸滴定液(0.5mol/L)相当于5.30mg的无水碳酸钠。根据本液的消耗量与无水碳酸钠的取用量,算出本液的浓度。
4.甲基红-溴甲酚绿混合指示液
取0.1%甲基红的乙醇溶液20mL,加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30mL,摇匀。
操作步骤: 精密称取供试品约20mg,照氮测定法(附录ⅦD第二法)将结果乘6.25,即得。
注:“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
参考文献: 中华人民共和国药典,国家药典委员会编,化学工业出版社,2005年版,一部,p.31。