Coombs试验除了广泛应用于血液病的检测外,还可采用专一特异性的抗球蛋白的血清如IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗补体血清等,分析结合于红细胞上的不完全抗体的免疫球亚类。
有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力,称为病毒的血凝,利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验,以此来推测被检材料中有无病毒存在,是非特异性的,但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制,即血球凝集抑制(HI)试验,具有特异性。通过HA-HI试验,可用已知血清来鉴定未知病毒,也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
试验方法
[目的要求]
掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法,了解其实用价值。
[材料与试剂]
1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板,50L定量移液器,滴头,微型振荡器。
2. 生理盐水,0.5% 鸡红细胞悬液。
3. 新城疫病毒液(尿囊液或冻干疫苗液),新城疫阳性血清,被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]
血球凝集(HA)试验
1. 在96孔微量反应板上进行,自左至右各孔加50L生理盐水。
2. 于左侧第1孔加50L病毒液(尿囊液或冻干疫苗液),混合均匀后,吸50L至第2孔,依次倍比稀释至第11孔,吸弃50L;第12孔为红细胞对照。
3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50L,在振荡器上振荡,室温下静置后观察结果(表4-1)。
表 4-1 病毒血凝试验的操作方法(单位:L)
孔 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
病毒稀释度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对照
生理盐水 50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
病毒液 50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
0.5%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
弃50
结果观察 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ + + - -
4. 结果判定:
从静置后10 min开始观察结果,待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集,沉于孔底,平铺呈网状,即为100% 凝集(++++),不凝集者(-)红细胞沉于孔底呈点状。
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价,即为一个凝集单位。从表4-1看出,该新城疫病毒液的血凝价为1:128,则l:128为1个血凝单位,1:64、l:32分别为2、4个血凝单位,或将128/4=32,即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。