采用不同浓度MDA 体外干预大鼠肝线粒体,氧电极法检测线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O),测定呼吸链复合物及α-酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活性.结果:线粒体经MDA作用后,以苹果酸/谷氨酸或琥珀酸作底物,线粒体两条呼吸途径对MDA呈现不同的耐受力,前者在MDA 100 μmol/L时RCR显著降低(P<0.05),400 μmol/L时P/O降低(P<0.05);后者MDA浓度达到400和800 μmol/L时,线粒体P/O及RCR值显著降低(P<0.05).丙酮酸脱氢酶及α-酮戊二酸脱氢酶分别在50 μmol/L和100 μmol/L时活性下降(P<0.05),而MDA浓度达到1 mmol/L时,苹果酸脱氢酶活性降低(P<0.05).呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ分别在MDA400和800 μmol/L时最大反应速度(Vm)降低(P<0.05),但MDA(0～3.2 mmol/L)对呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ的Vm及米氏常数(Km)没有影响.结论:MDA对线粒体呼吸链及α-酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶存在不同程度的损伤作用,不同酶对MDA损伤的敏感程度有所差异,本研究中相关酶受MDA 损伤的次序可能是:丙酮酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅰ、呼吸链复合物Ⅱ、苹果酸脱氢酶、呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ.

一：原理

丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3，5，5—三甲基恶唑-2，4。二酮)，其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的消光度值，所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为每克千重100—300ug·g-1，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3+的终浓度为0．5umol·L-1。

二：试剂

1：质量分数为10%三氯乙酸(TCA)；

2：质量分数0.6%硫代巴比妥酸：先加少量的氢氧化钠(1mol·L-1)溶解，再用10%的三氯乙酸定容；

三：方法

1：MDA的提取称取剪碎的试材1g，加入2mll0%TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，再加8mlTCA研磨，匀浆在4000r·min-1离心10min，上清液为样品提取液。

2：显色反应和测定 吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0．6%TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再离心。取上清液测定532、600和450nm波长下的消光度。

四：结果

C1=11.71D450

C2={6.45(D532 - D600) - 0.56D450}NW-1

C1——可溶性糖的浓度(mmol·L-1)

C2——MDA的浓度（·umol·L-1）

D450、0532、D600分别代表450、532和600nm波长下的消光度值。

N:提取液总体积（ml）

W:植物组织鲜重