全基因合成:一般对于分子较小而又不易得到的基因采用该方式。可将X链基因分成若干寡核苷酸单链片段(尤其待合成基因在100 个核苷酸以上时)，每个片段长度控制在40~60个碱基，并使每对相邻互补的片段之间约有6 个碱基交叉重叠。在体外将除基因两端末端外的所有片段磷酸化。混合退火后加人DNA 连接酶，即可得到较大的基因片段。如果需连接亚克隆的方法，最后将亚克隆的较大片段重组为完整的基因。采用分步连接、亚克隆的方法时，为便于从亚克隆中回收基因片段，应在片段两侧设计合适的酶切位点。由于每个亚克隆可以分别鉴定，因此可减少顺序错误的可能性。 在解释全基因合成前，先了解一下什么是“基因” 下面收录了对"基因"的五个定义，实为异曲同工· 1,基因是存在于细胞内有自体繁殖能力的遗传单位· 2,基因是一个具有遗传功能的特定核苷酸序列的DNA片段· 3,编码一个RNA或一条多肽链的DNA片段称为一个基因· 4,基因是生物体遗传的基本单位，存在于细胞的染色体上，作直线排列· 5,基因是生物体内一切具有自主复制能力的最小遗传功能单位，其物质基础是一条以直线排列·具有特定核苷酸序列的核酸片段·由众多基因构成了染色体·每个基因大体在1000-1500bp的范围，相对分子质量约为670000.