做转化的时候，进行酶连接反应时，注意保持低温状态，因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见，一般连接3小时，16度；对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时，注意加AMP时的温度，温度过高，会使克隆株无法筛选出来。我的方法是培基高温消毒后放在烤箱里，烤箱一般温度为55-60度，然后做的时候拿出来，这样好掌握温度。铺板前后注意用吹风机吹干； 对照的设立：为验证双酶切是否成功。
鉴于此,我们在国内首次通过从胚胎中钓取PEDF 的总RNA,采用RT-PCR 技术,得到PEDF 的全基因序列,通过双酶切(EcoRI/SalI),采用现今最有效的原核表达系统--pET28a 原核表达载体,构建了pET28a/PEDF 原核表达重组体,并转化至原核表达宿主菌大肠杆菌B...
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...t-PA重组质粒的鉴定用构建的pEGFP-N3-t-PA重组质粒转化E.coliDH5 克隆,扩增,提取并纯化重组质粒DNA;将重组质粒用双酶切(HindⅢ和BamHI)鉴定.
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双酶切反应 Double Digestion ; Double Digests ; digestion ; buffer digestion
结果构建的EBO G87和EBO WT重组载体经内切酶双酶切鉴定及核苷酸序列测定证实。
Results The constructed vectors of EBO-WT and EBO-G87 were identified by restriction enzyme digestion and nucleotide sequencing.
探讨和初步建立了利用双重pcr和双酶切技术同时检测esr、RYR1两个基因的变异的方法。
The duplex PCR and double digestion technique were established to detect polymorphisms of ESR and RYR1 simultaneously.
结论：由于PCR -双酶切方法快速、简单、易操作，且特异性好，可作为CMT1A基因诊断的一种初筛方法。
CONCLUSION: Because of the speediness, simpleness and good specificity, the PCR combined with restriction enzyme digestion can be used as a primary screening in the gene diagnosis of CMT1A.
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