虽然这些方法有一定的效果并被不断改进，但是仍然受制于繁琐的酶切，适配体连接 (adaptor ligation)和纯化步骤。而且，RP-PCR的随机引物经常会因为非特异性退火而产生多余产物。
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adaptor ligation
适配器结扎
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