二次突变假说（Knudson's two hit hypothesis）二次突变假说认为遗传性肿瘤家族连续传递时，已经携带了一个生殖细胞系的突变，此时若在体细胞内再发生一次体细胞突变，即产生肿瘤，这种事件较易发生，所以发病年龄较早；而散发性肿瘤家族先需要有一个细胞内发生突变产生杂合体（heterozygous），继而再次突变失去杂合结构的两次体细胞突变而产生的，发生率较低或不易发生，所以发病年龄一般较晚。但，第二次突变的可能性会比第一次随机突变高，所经历的突变时间也比第一次随机突变时间短。
Knudson用二次突变假说（two-hit hypothesis）来解释视网膜母细胞瘤的遗传性与散发性，也可解释遗传性视网膜母细胞瘤的显性遗传与肿瘤抑制基因（隐性基因）的关系。
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