(1) 应用自动分析仪时可根据仪器条件及试剂反应情况设计反应程序。自动分析仪要求酶反应快速(最好5min内完成反应)。反应慢的试剂只可用于手工操作，待反应达到终点时再比色。试剂和标本用量可根据比色杯容积按比例放大或缩小。 (2) 为保证酶反应迅速、完全并利于酶试剂长期稳定保存，要求酶制剂性能好、酶过量。酶试剂配好后一般应可在4℃存放3天以上。不同批试剂应检查反应到达终点时间、颜色稳定性及线性范围。 (3) 如样品中胆固醇含量超出试剂线性范围(一般酶试剂测定范围应为5g/L以内)，可用生理盐水稀释标本再测，结果须乘以稀释倍数。 (4) 血清中胆红素0.1g/L以下、抗坏血酸0.05g/L以下及轻度溶血不至于影响结果。血清中其他类固醇含量甚微，不引起明显干扰。 (5) 在仪器稳定及操作者熟练的情况下，批内CV<1%，批间CV<2%。 (6) 由于纯胆固醇与血清胆固醇基质不同，反应速度不同，在酶法测定时如用纯胆固醇标准结果往往偏低。因此主张用标准参考血清做标准以达到与血清标本相同的反应，标准参考血清应用参考方法，以附合国际标准的纯胆固醇为标准标定。该标准血清可存放于-20℃保存1年。不宜反复冻融。