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苏木素是从洋苏木中提取的一种染色剂,它在被氧化后生成苏木精,同媒染剂(常用的是三价的铁或铝的盐)一起使用,能够使细胞核染色。苏木素是一种碱性染料。

简介

英文名:hematoxylin,也拼成haematoxylin,分子式:C16H12O6
苏木素和伊红组织学上被经常使用,与碘液不同,这是一种永久染色剂。其他常用的含有苏木素的染色剂有磷钨酸苏木素染色剂,也就是磷钨酸与苏木素的混合物。
化学结构简式

化学结构简式

苏木素染色剂经常为组织的研究使用。 明矾和三价铁盐常常被用作媒染剂,展示核和细胞质结构。这些媒染剂的原理都是形成媒染剂-染料-组织复合体,从而显示颜色。使用的盐不同颜色也不同: 当用铁盐呈现深蓝色颜色沉淀,用铝盐通常显示蓝白色。下面分别介绍铝苏木素溶液和铁苏木素溶液。

历史

在20世纪70年代,由于巴西热带雨林被大量砍伐,洋苏木大量减少,苏木素的产量随即大量减少。苏木素的价格上升惊人,因而大大提高了组织病理学诊断的成本,引起了寻找苏木素替代品的高潮。不过,在各种苏木素的替代品的地位真正确立之前,苏木素又重返市场,又在组织病理学诊断中发挥其重要作用。到2013年为止,几种推荐使用的替代染剂有铬天青、焙花青、茜素紫(又名焦没食子酚酞、棓因)。这些染料都用三价铁离子作为媒染剂。焙花青还可以用铬矾媒染剂

铝溶液

常用的两种铝苏木素溶液有Ehrlich氏溶液和Harris氏溶液。铝苏木素溶液能够把细胞核染成半透明的浅蓝色,在酸性环境下会迅速变成红色。作为媒染剂使用的钾铝硫酸盐在碱性溶液通常结合与氢氧根形成不能溶解的氢氧化铝。 在过量的酸中,氢氧化铝由于缺乏OH -离子而溶解,因此,铝苏木素溶液的酸性溶液变成红色。 在铝苏木素溶液染色时,被染色的部分通常转移到一种碱性溶液中,中和酸并释放氢氧根,形成一个不溶的蓝色铝苏木精复合物。
由于自来水碱性不十分强,通常用每升含有33.5 g NaHCO4和20克的MgSO4,并加入百里香酚兰的溶液代替。使用冷水会减慢染色过程。 实际上,使用在10°C之下的冷水甚至可能导致组织呈现红色。

Ehrlich

1 g 苏木素
100 ml无水乙醇
60 g 明矾(铝钾硫酸盐)
100 ml甘油
100 ml蒸馏水
10 ml冰醋酸(HOAc)
首先,在100 ml无水乙醇中溶解1 g 苏木素,微热。 然后,在100 ml蒸馏水中溶解60 g明矾加入100 ml甘油微热。 第三步,混合二种溶液并且增加10 ml冰醋酸。 然后转移到用棉花轻轻塞住口的烧瓶中,暴露在空气和阳光中几个星期,每天震荡溶液。在这个过程中,苏木素被部分氧化。 最后,把溶液转移到一个封口很严的试剂瓶中在温暖处存放。
染色时,有时需要加入0.3 g碘酸钠。 因为苏木素溶液被氧化,溶液的颜色从紫色将变成深红,而醋酸刺激性气味将变成宜人的芳香。 甘油作为稳定剂并且减速溶液的蒸发。 然而,甘油可以减速染料的成熟,所以可以在最初的制备以后的4到6个星期后加入。
Ehrlich的苏木素溶液染色时,黏多糖物质例如软骨素也被染成蓝色。 染色时间通常是15到40分钟。

Harris

1 g 苏木素
10 ml无水乙醇
20 g 明矾(铝钾硫酸盐)
0.5 g 氧化汞
190 ml蒸馏水
10 ml冰醋酸(HOAc)
首先,在10 ml无水乙醇中溶解1 g 苏木素,微热。 然后,在500 ml烧杯中加入190ml蒸馏水和20 g明矾。 第三步,加入氧化汞,立即插入冷水中迅速降温。要用开口较大的容器,防止加入氧化汞后放出氧气引起爆炸。加入氧化汞后,溶液应该呈现深紫色。加入4%的l冰醋酸能够使对细胞核染色的特异性更强。 最后,把溶液过滤,转移到一个密封的试剂瓶中,立即使用或长期保存。
Harris氏苏木素配方染色被用于细胞核的常规检查和性染色体的检查。染色时间通常是5到20分钟

Cole

1.5 g 苏木素
50 ml1%的碘的95%乙醇溶液
700ml饱和的明矾溶液
250 ml蒸馏水
把苏木素溶解到250ml温的蒸馏水中,加入碘酒,加入明矾溶液,煮沸。
Cole氏苏木素染色溶液使用前要冷却,过滤。染色时间通常是10分钟。

Mayer

比Ehrlich氏苏木素配方灵敏度好,不会或很少会把黏多糖物质染色。
1 g 苏木素
0.2g NaIO3
50g 明矾
50g水合三氯乙醛
1000 ml蒸馏水
把苏木素,明矾,碘酸钠加入1000ml蒸馏水溶解,过夜放置,以便苏木素充分溶解。加入柠檬酸水合氯醛,煮沸5分钟后冷却。

铁溶液

常用的两种铁苏木素溶液有Weigert氏溶液(使用氯化铁铵作为媒染剂)和Heidenhain氏溶液(使用硫酸铁铵作为媒染剂)。它们都是活泼的氧化剂,不能长期保存。铁苏木精溶液能够用于几乎所有的固定剂,而且如果用于媒染的过量的铁离子都被冲洗净的话,能够永久着色。在酒精中浸泡多年的组织往往不易着色,这时就可以选择铁苏木素染色,效果很好。铁苏木素溶液会把细胞核染成灰黑色,常常用于显微照相。

Weigert

Weigert氏苏木素配方是实验室使用的标准铁苏木素溶液,特别是在染色显示肌纤维时。当使用的生物材料或已经用过的试剂中含有酸时,最适合使用的就是Weigert氏苏木素溶液,因为这时所有的铝苏木素溶液染细胞核时都会褪色。
A液
1g苏木素
B液
4ml 30%无水氯化铁溶液
1ml浓盐酸
100ml蒸馏水
在酒精中溶解苏木素,微热。在另一个容器中混合盐酸、氯化铁和蒸馏水。两种溶液都很稳定,可以放置6个星期不变质。染色前,把两溶液等量混合,得到深黑色混合液,即可染色。混合液可以保存1~2天。

Heidenhain

Heidenhain氏苏木素配方用于细胞学染色观察,特别是用于一些较薄的组织的回染。它可以用于细胞核的染色观察,能够清楚地显示染色体、染色质以及细胞质中线粒体的位置。此外,还可以使髓鞘染色。
0.5 g 苏木素
10 ml 95%乙醇
90 ml蒸馏水
25 g 硫酸铁铵
100 ml蒸馏水
染色剂媒染剂分开配制,放置4~5星期成熟。染色时再混合。

磷钨酸

1g苏木素
20g磷钨酸
1000ml蒸馏水
用多份水分别溶解溶质,然后再混合起来。光照下放几个星期成熟。加入0.177g钾可以立即成熟。
配好后,染色剂的颜色为红棕色到紫色。染色时,细胞核,肌动纤维为蓝色,骨骼、软骨为橘红色、红棕色直到深砖红色。由于染色是逐步进行的,所以最好每小时显微镜观察一次。酒精可以洗去红色,因此,冲洗时间要短。染色时间是12~24小时。
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- 来自原声例句
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